毒素调查物油污染中黄状况汉中一曲霉市市售植

黄曲霉毒素(aflatoxin，汉中AF)是市市售植由黄曲霉(Aspergilusflavu)和寄生曲霉(Aspergillusparasiticus)经聚酮途径所产生一组有毒次生代谢产物，其结构含有一个二呋喃环与一个氧杂萘邻酮。物油污染目前已知的中黄状况黄曲霉毒素有20多种，已分离鉴定出的曲霉有黄曲霉毒素有 B 1、B 2、毒素调查G 1、汉中G 2 等18种，市市售植其中AFB1毒性和致癌性最强。物油污染自然环境下，中黄状况农作物如水稻、曲霉油菜籽、毒素调查花生等，汉中在种植后生长、市市售植收获的物油污染过程中，很容易被产毒真菌污染，被污染的谷物，在储藏、加工、运输等过程通过食物链各个环节传递最终危害人类健康。联合国粮食与农业组织（FAO）统计，每年全球粮食将近有四分之一受到真菌毒素污染，造成了数以亿计的经济损失。AF的产毒需要适宜的温湿度和经济发展情况有关，热带和亚热带地区降水多、温度高的地区食品受黄曲霉毒素的污染情况较严重，欧美经济发达地区的污染状况远低于东南亚等经历落后地区。

经过大量文献查阅，胡佳薇等人评价过2012-2015陕西市售食品中AF的污染情况，对于陕南地区总体的市售食品进行了调查，未见关于汉中地区植物油中黄曲霉毒素的系统污染调查分析，也为见关于该地区植物油中毒素超标的相关报告和处罚。汉中地处陕西南部，全年气候湿润，降水丰沛，陕西最大的优质油菜籽种植基地，有“陕西鱼米之乡”的美称，菜籽油是当地居民膳食结构中的主要品种。随着社会经济的发展，商品流通加速，汉中市场上除了本地产菜籽油外，还有来自其他地区的大豆油、花生油、调和油、香油等。本研究结合汉中当地的种植条件和饮食习惯，从8个行政区县中采集了160份植物油，进行4种AF的联合污染状况的调查，评估该地区植物油中AF污染状况，系统掌握该地区AF的污染情况，为食品安全控制和当地居民的AF膳食暴露评估提供依据。

1 材料和方法

1.1材料

1.1.1样品

2019年1月至2020年12月，陆续对汉中市的8个行政区县的超市商场、粮油店、生产企业、餐饮店按照行政区域为分成特征进行随机采集（见图1、图2）。累计共采集到食用植物油160份（其中菜籽油120份，花生油、大豆油、调和香油等40份）。逐批采样后封存，干燥阴凉处保存，备检。

1.1.2 仪器设备

水浴恒温振荡器（常州亿能实验仪器厂），分析天平（日本岛津 d=0.01 g）；氮吹仪（睿科科技有限公司）；高效液相色谱仪（日本岛津LC-20AD，荧光检测器）；光化学衍生器、C18色谱柱（月旭科技有限公司）；黄曲霉毒素免疫亲和柱3mL（Rome labs）；MIlli-Q纯水机（美国密理博公司）。

1.1.3 试剂

甲醇（色谱纯，赛默飞）；吐温-20（分析纯，科密欧）氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钾（分析纯，科龙），黄曲霉毒素标准溶：AFG2 0.537 μg/mL，AFG1 0.539 μg/mL , AFB2 2.08 μg/mL，AFB1 2.07 μg/ mL（青岛普瑞邦 STD#1081）。

1.2 方法

1.2.1样品预处理

按照国标GB5009.22-2016《食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定》第三法高效液相色谱-柱后衍生法进行试验。

样品提取：称取5.0 g（精确至0.01g）粉碎混合均匀样品于离心管中，加入甲醇水溶液（80+20）20 mL涡旋混合，摇床中震荡1 h，玻璃滤纸过滤，滤液备用。

样品净化：将免疫亲和柱取出恢复至室温，准确吸取2 mL滤液，加入25 mL的PBS溶液于25 mL注射器中，以2 mL/min速度匀速下滴，样液滴完后，用10 mL的水淋洗亲和柱2次，最后用2 mL甲醇洗脱亲和柱，收集洗脱液，氮气吹干用流动相定容至1mL，涡旋，过滤膜，装瓶上机检测。该法的检出限为AFG2 0.01 μg/mL，AFG1 0.03 μg/mL，AFB2 0.01 μg/mL，AFB1 0.03 μg/ mL。

1.2.2液相条件

流动相：甲醇-乙腈-水（47：3：50，V/V）；进样量：20 μL；检测波长：激发波长：360 nm，发射波长440 nm；流速：0.8 mL /min；柱温：35℃；色谱柱：月旭C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）。

1.2.3评价依据

全球有 100 多个国家和地区制订了食品和饲料中 AFT限量标准。我国在GB2761-2017仅对食品中AFB1采取了严格的限量标准，植物油（不包括玉米油、花生油）均要求≤10 μg/kg，玉米油、花生油要求≤20 μg/kg，暂时没有关于AF总量的限量要求。

1.2.4标准曲线

用AF混标配制标准曲线，具体梯度为（ng/mL）：AFB₁:1.04、2.08、3.12、4.16、5.20、10.4；AFB₂:1.03、2.07、3.10、4.14、5.18、10.3；AFG₁:0.27、0.54、0,81、1.08、1.35、2.70；AFG₂:0.27、0.53、0,80、1.06、1.33、2.66，通过光化学衍生器柱后衍生，带荧光检测器的高效液相色谱分离测定，得出各组分不同浓度下的峰面积，以峰面积对标品的浓度进行线性回归分析，结果见表1。

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